چکيد ه

  سابقه و هدف

  ‌ آلبومين عمده‌ترين پروتئين پلاسما می‌باشد. اين پروتئين نه تنها به عنوان حامل بسياری از ماکروملکول‌ها در بدن نقش عمده‌ای ايفا می‌کند بلکه نقش مهمی در تنظيم فشار اسمزی دارد. امروزه از آلبومين در درمان خونريزی‌ها و سوختگی‌های شديد و هم‌چنين در درمان افراد مبتلا به کمبود آلبومين استفاده می‌شود. مصرف ساليانه آلبومين در دنيا حدود 450 تن می‌باشد. به‌منظور برطرف کردن اين نياز و توليد آلبومين عاری از هرگونه آلودگی از روش‌های بيوتکنولوژی استفاده گرديده است.

  در اين تحقيق از مخمر هانسونلا پلی مورفا که امروزه در سطح وسيعی به ‌منظور توليد پروتئين‌های هترولوگ به‌کار برده می‌شود،‌ برای آلبومين انسانی نوترکيب استفاده گرديده است.

  مواد وروش‌ها

  مطالعه انجام شده از نوع تجربی (experimental) است. به‌منظور توليد پروتئين آلبومين نوترکيب و هم‌چنين بهينه ‌سازی شرايط توليد از سوش RB-11 هانسونلا پلی ‌مورفا به ‌عنوان ميزبان استفاده گرديد. پلاسميد
pFMPT-MFα حاوی cDNA آلبومين تحت کنترل پروموتور FMD با استفاده از روش الکتروپوريشن داخل ميزبان شد و سپس تحت شرايط مختلف با بررسی پارامترهايی نظير زمان انکوباسيون، محيط کشت، دما و مهارکننده‌های پروتئازی بيان آلبومين مورد بررسی قرار گرفت. آلبومين توليد شده با روش‌هايی هم‌چون الايزا، HPLC و Western Blot ارزيابی شد.

  يافته‌ها

  درطی اين تحقيق چهارعامل مهم دربيان پروتئين آلبومين موردمطالعه قرارگرفت ومشخص گرديد که از بين سه محيط derepression ، YNB 1% Glycerol ، YP 1% Glycerol ،‌ YNB 1% Glycerol with buffer ، محيط کشت YNB 1% Glycerol with buffer و از بين سه دمای 25،‌30 و37 درجه سانتی گراد دمای 37 درجه و از بين سه زمان انکوباسيون، 24، 48 و 72 ساعت، مدت 48 ساعت با حضور آنتی ‌پروتئازها بيشترين ميزان توليد آلبومين به‌دست آمد.

  نتيجه گيری

  بالاترين ميزان توليد شده تحت شرايط بهينه به‌دست آمده در مقياس آزمايشگاهی، mg/l 6/17 را نشان داد. از سوی ديگر با استفاده از اين سوش در شرايط نيمه صنعتی، ميزان mg/l 478 آلبومين توليد شد و اين امر نشان‌دهنده آن است که می‌توان توليد پروتئين آلبومين را در شرايط انبوه ادامه داد.

  کلمات کليدی: آلبومين سرم انسانی، مخمر هانسونلاپلی مورفا، آلبومين نوترکيب