چکيد ه

  سابقه و هدف

  آنتی‌ژن Core ويروس هپاتيت C ، يک پروتئين چندکاره با ارزش‌های ويژه در اهداف تشخيصی و تحقيقات پاتوفيزيولوژيک می‌باشد. اکثر اين خواص مربوط به بخش هيدروفيل (آمينو اسيد: 122-2) اين آنتی‌ژن بوده و دسترسی به روشی برای توليد مقادير انبوه از اين پروتئين در فرم خالص و طبيعی، از اهميت به سزايی برخوردار است. به اين جهت با هدف همسانه‌‌سازی(کلونينگ ژن)، ابراز پروتئين با بازدهی بالا، تخليص در فرم طبيعی و ارزيابی خواص ايمونوژنيک اين بخش از پروتئين Core ويروس هپاتيت C در يک سيستم پروموتری T₇ تحت القا آرابينوز، مطالعه حاضر صورت پذيرفت.

  مواد وروش‌ها

  در اين مطالعه تجربی، از روش PCR برای جداسازی ژن و از حامل pIVEX2.3 جهت کلونينگ ژن با استفاده از روش‌های مهندسی ژنتيک استفاده شد. آناليزهای پروتئين توسط SDS-PAGE ، وسترن بلات و اليزا بر روی سرم بيماران HCV مثبت انجام شد و تخليص پروتئين به روش کروماتوگرافی جذبی بر روی نيکل (Ni-NTA) صورت پذيرفت.

  يافته‌ها

  ژن مربوط به بخش هيدروفيل HCV Core با موفقيت و با ترادف صحيح، جداسازی و به‌طور مناسب در کاست بيانی کلون گرديد. سيستم القا آرابينوز به‌طور مؤثر، پس از 3 ساعت، قابليت توليد پروتئين نوترکيب با بازدهی mg/L 5/3 را داشته و پروتئين توليد شده به سهولت و دريک مرحله قابليت تخليص شدن تاحدود 80 درصد بر روی ستون جذبی Ni-NTA را دارا می‌باشد. پروتئين خواص آنتی ژنيک خود را در ساختمان طبيعی حفظ می‌نمايد.

  نتيجه گيری

  در اين مطالعه برای اولين بار نشان داده شده که سيستم القا آرابينوز به‌طور مؤثر، قابليت کاربرد در توليد بخش هيدروفيل پروتئين Core را دارد و پروتئين تخليص شده، احتمالاً در شرايط طبيعی از لحاظ ايمونولوژيک، قابليت کاربرد برای اهداف تحقيقی و تشخيصی را داراست.